Реконструкция мембранных ферментов

Мембранная энзимология » Реконструкция мембранных ферментов

После того как мембранный фермент очищен, для изучения его каталитической активности желательно, а часто и необходимо реконструировать его с фосфолипидами. Кинетические характеристики многих ферментов in situ и после очистки и реконструкции одинаковы. Несмотря на то что свойства фермента в искусственных системах могут изменяться, изучение очищенных и реконструированных ферментов дает большие преимущества. В частности, а такой системе ие протекают различные конкурирующие реакции, присущие биомембранам. Удается устранить и другие осложняющие исследование проблемы. Использование реконструированной системы позволяет не только охарактеризовать изолированную систему, но и определить минимальное число компонентов, необходимых для проявления тех или иных биохимических активностей. С помощью реконструкции в фосфолипидные везикулы, например, было показано, что за поглощение лактозы клетками Е. coli ответствен только один белок, лактозопермеаза. Аналогичным способом было однозначно определено минимальное число белковых компонентов, необходимых для реконструкции дыхательной цепи Е. coli и системы аденилатциклазного гормонального ответа.

Для встраивания солюбилизированных в детергенте очищенных мембранных компонентов в модельные мембранные системы разработано несколько методов. Чаще всего ферменты встраиваются в однослойные фосфолипидные везикулы. Характеристики же белков, активно или пассивно увеличивающих ионную проводимость мембраны, часто определяют после их встраивания в плоский бислой. Плоские мембраны удобны для электрических измерений, позволяющих определить величину ионной проводимости и прочие производные характеристики, например зависимость доли открытых каналов от приложенного электрического напряжения. В таких системах, однако, трудно или даже невозможно определить биохимические характеристики белка, в частности его каталитические активности, отличные от ионной проницаемости.


Интересное на сайте:

Наследственность
Революция в генетике была подготовлена всем ходом могущественного развития идей и методов мендилизма и хромосомной теории наследственности. Уже в недрах этой теории было показано, что существуют явления трансформаций у бактерий; что хромо ...

Растворимые ферменты или ферментные ансамбли, которые in vivo могут быть ассоциированы с мембраной
В литературе все чаще появляются данные о возможной ассоциации целого ряда растворимых ферментов с мембраной. Большинство работ посвящено связыванию ферментов цикла трикарбоновых кислот и /3-окисления жирных кислот с внутренней митохондри ...

Строение здоровой кожи человека. Кожа – это целая тканевая система
Она состоит из трех основных компонентов: эпидермиса, дермы и подкожно-жировой клетчатки. Все это - звенья одной цепи, которые находятся в тесной связи между собой. Эпидермис – самый верхний слой нашей с вами кожи. Именно он встает на пут ...